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大鼠Elisa试剂盒试验详细记录是重点

更新时间：2015-03-02 点击次数：1349次

　　本大鼠Elisa试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠S100蛋白(S-100)水平。用纯化的大鼠S100蛋白(S-100)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入S100蛋白(S-100)，再与HRP标记的S100蛋白(S-100)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，大鼠Elisa试剂盒经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的S100蛋白(S-100)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠S100蛋白(S-100)浓度。

　　大鼠Elisa试剂盒操作程序

　　1．确定本次检测所需的已包被抗体的酶标板孔数目。

　　2．将倍比稀释的标准品各0.1ml依次加入一排7孔中，1孔只加样品稀释液的作为对照。大鼠Elisa试剂盒处理后的标本按100ul每孔加入。

　　3．酶标板加上盖，37℃反应90分钟。

　　4．大鼠Elisa试剂盒反应后用自动洗板机吸去酶标板内的液体；或甩去酶标板内液体，再对着吸水纸拍几下。洗涤2次。

　　5．将准备好的生物素抗体工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反应60分钟。

　　6．0.01M TBS或0.01M PBS洗涤3次，大鼠Elisa试剂盒每次浸泡1分钟左右。

　　7．将准备好的ABC工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反应30分钟。

　　8．0.01M TBS或0.01M PBS洗涤5次，大鼠Elisa试剂盒每次浸泡1-2分钟左右。

　　9．每孔0.1ml依次加入TMB工作液，37℃避光反应，反应过程中，要经常的观察，当肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔差别不明显时，即可加入TMB终止液0.1ml/孔。（显色反应zui长不要超过30分钟）。

　　10．大鼠Elisa试剂盒用酶标仪在450nm测定O.D.值。

　　11．根据样品的吸光值在坐标上找出对应的浓度。用户也可以使用各种应用软件来计算。应记住由于样品稀释了N倍，其实际浓度应该×N。

　　大鼠Elisa试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知OTR浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将OTR和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中OTR的浓度呈比例关系。

　　大鼠Elisa试剂盒是基于经典酶联夹心技术原理，能测量鸭TNFα，只能用于研究用途，不得用于医学诊断。用户须查阅文献了解标本内待测因子的含量，决定适当的稀释倍数，以使稀释后样品中待测因子的浓度处于大鼠Elisa试剂盒的*检测范围。样品的稀释应有详细记录。

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